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油醚液,水液用乙酸乙酯洗涤 2 次,每次 20ml,弃去洗液,用水饱和的正丁醇
振摇提取 2 次,每次 20ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇 1ml 使溶解,作
为供试品溶液。另取铁皮石斛对照药材 1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色
谱法 ( 附录Ⅵ B) 试验,吸取上述两种溶液各 2 ~ 5μl,分别点于同一聚酰胺
薄膜上,使成条状,以乙醇 - 丁酮 - 乙酰丙酮 - 水 (15:15:5:85) 为展开剂,
展开,取出,烘干,喷以三氯化铝试液,在 105℃烘约 3 分钟,置紫外光灯 (365nm)
下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光
斑点。
【检查】
甘露糖与葡萄糖峰面积比 取葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成
每 1ml 含 50pg 的溶液,作为对照品溶液。精密吸取 O.4m1,按 [ 含量测定 ]
甘露糖项下方法依法测定。供试品色谱中,甘露糖与葡萄糖的峰面积比应为
2.4 ~ 8.0。
水 分 不得过 12.O% ( 附录Ⅸ H 第一法 )。
总灰分 不得过 6.O% ( 附录Ⅸ K)。
【浸出物】
照醇溶性浸出物测定法 ( 附录 X A) 项下的热浸法测定,用乙醇作溶剂,
不得少于 6.5%。
【含量测定】
多 糖 对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加
水制成每 1m1 含 90μg 的溶液,即得。
标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 O.2ml、O.4ml、O.6m1、O.8ml、
1.Oml,分别置 10ml 具塞试管中,各加水补至 1.oml,精密加入 5%苯酚溶液
1ml( 临用配制 ),摇匀,再精密加硫酸 5ml,摇匀,置沸水浴中加热 20 分钟,
取出,置冰浴中冷却 5 分钟,以相应试剂为空白,照紫外一可见分光光度法 ( 附
录 V A),在 488nm 的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,
绘制标准曲线。
供试品溶液的制备 取本品粉末 ( 过三号筛 ) 约 O.3g,精密称定,加水
200ml,加热回流 2 小时,放冷,转移至 250ml 量瓶中,用少量水分次洗涤容
器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液 2mI,
置 15ml 离心管中,精密加入无水乙醇 10ml,摇匀,冷藏 1 小时,取出,离心
( 转速为每分钟 4000 转 )20 分钟,弃去上清液 ( 必要时滤过 ),沉淀加 80%乙
醇洗涤 2 次,每次 8ml,离心,弃去上清液,沉淀加热水溶解,转移至 25ml 量
瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,即得。
测定法 精密量取供试品溶液 1m1,置 10ml 具塞试管中,照标准曲线制
备项下的方法,自“精密加入 5%苯酚溶液 1ml”起,依法测定吸光度,从标
准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算,即得。
本品按干燥品计算,含铁皮石斛多糖以无水葡萄糖 (C6H12O6) 计,不得
少于 25.O%。
甘露糖 照高效液相色谱法 ( 附录Ⅵ B) 测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙
腈 -O.02mol / L 的乙酸铵溶液 (20:80) 为流动相;检测波长为 250nm。理论
板数按甘露糖峰计算应不低于。t000。
校正因子测定 取盐酸氨基葡萄糖适量,精密称定,加水制成每 1ml 含
12mg 的溶液,作为内标溶液。另取甘露糖对照品约 10mg,精密称定,置 100ml
量瓶中,精密加入内标溶液 1m1,加水适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取
400μ1,加 O.5m01/L 的 PMP(1- 苯基 -3- 甲基 -5- 吡唑啉酮 ) 甲醇溶液与 O.3mol
/ L 的氢氧化钠溶液各 400μ1,混匀,70℃水浴反应 100 分钟。再加 O.3mol
/ L 的盐酸溶液 500μl,混匀,用三氯甲烷洗涤 3 次,每次 2ml,弃去三氯甲
烷液,水层离心后,取上清液 10μl,注入液相色谱仪,测定,计算校正因子。
测定法 取本品粉末 ( 过三号筛 ) 约 O.12g,精密称定,置索氏提取器中,
加 80%乙醇适量,加热回流提取 4 小时,弃去乙醇液,药渣挥干乙醇,滤纸筒
拆开置于烧杯中,加水 100ml,再精密加入内标溶液 2ml,煎煮 1 小时并时时搅拌,
放冷,加水补至约 100ml,混匀,离心,吸取上清液 1ml,置安瓿瓶或顶空瓶中,
加 3.Omol/L 的盐酸溶液 O.5ml,封口,混匀,110℃水解 1 小时,放冷,用 3.Omol
/ L 的氢氧化钠溶液调节 pH 值至中性,吸取 400μl,照校正因子测定方法,自“加
O.5mol / L 的 PMP 甲醇溶液”起,依法操作,取上清液 10μ1,注入液相色谱仪,
测定,即得。
本品按干燥品计算,含甘露糖 (C6H1206) 应为 13.O%~ 38.O%。